兔一氧化氮合成酶(NOS)  ELISA試劑盒

英文：Rabbit nitric oxide synthase,NOS ELISA Kit

規(guī)格：96T/48T

試劑盒質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)

試劑盒的質(zhì)控和質(zhì)量密切相關(guān)。我們可以在說(shuō)明書(shū)中可以找到質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)，在購(gòu)買(mǎi)前應(yīng)檢查試劑盒是否進(jìn)行過(guò)質(zhì)控實(shí)驗(yàn)。檢查試劑盒是否經(jīng)過(guò)批次內(nèi)（Intra-Assay）及批次間（Inter-Assay）的精密度檢測(cè)、摻入回收實(shí)驗(yàn)、線性稀釋實(shí)驗(yàn)及交叉反應(yīng)等測(cè)試，確保試劑盒的結(jié)果重現(xiàn)性及準(zhǔn)確性。（CV% 一般小于 10% 比較好，線性和回收率的范圍在 80%-120% 比較合適）

試劑盒的有效期

一般試劑盒的有效期為半年到一年，樣本準(zhǔn)備的時(shí)間需要考慮進(jìn)試劑盒的有效期。一般建議一個(gè)試劑盒一次用完，如確需分次使用，需確認(rèn)標(biāo)準(zhǔn)品有多份。標(biāo)準(zhǔn)品稀釋之后需分管保存，理論上是48小時(shí)內(nèi)用完，但實(shí)在是樣本收集需要時(shí)間的話，盡量在一周內(nèi)用完。

抗原和抗體的結(jié)合范圍

在選擇試劑盒的時(shí)候還應(yīng)注意抗原和抗體的結(jié)合范圍是全長(zhǎng)蛋白還是活體剪切體或者磷酸化特異性位點(diǎn)的蛋白。比如Human Caspase-7 ELISA Kit檢測(cè)的是全長(zhǎng)蛋白，Human Cleaved Caspase-7(Asp198) ELISA Kit檢測(cè)的則是活體剪切體，Human Phospho-AKT1(S473) Quantitative ELISA kit檢測(cè)的是S473磷酸化的AKT1蛋白。應(yīng)根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)?zāi)康臏?zhǔn)確選擇相應(yīng)的試劑盒。

檢測(cè)的指標(biāo)數(shù)量

ELISA試劑盒更適合用于單個(gè)指標(biāo)的大量樣本檢測(cè)，如果檢測(cè)指標(biāo)超過(guò) 5 個(gè)，且樣本量較小時(shí)，ELISA 檢測(cè)方法并不是*。建議考慮多因子檢測(cè)方法，例如Raybiotech抗體芯片或者Luminex液相芯片方法，CBA檢測(cè)方法等

試劑盒質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)

試劑盒的質(zhì)控和質(zhì)量密切相關(guān)。我們可以在說(shuō)明書(shū)中可以找到質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)，在購(gòu)買(mǎi)前應(yīng)檢查試劑盒是否進(jìn)行過(guò)質(zhì)控實(shí)驗(yàn)。檢查試劑盒是否經(jīng)過(guò)批次內(nèi)（Intra-Assay）及批次間（Inter-Assay）的精密度檢測(cè)、摻入回收實(shí)驗(yàn)、線性稀釋實(shí)驗(yàn)及交叉反應(yīng)等測(cè)試，確保試劑盒的結(jié)果重現(xiàn)性及準(zhǔn)確性。（CV% 一般小于 10% 比較好，線性和回收率的范圍在 80%-120% 比較合適）

試劑盒的有效期

一般試劑盒的有效期為半年到一年，樣本準(zhǔn)備的時(shí)間需要考慮進(jìn)試劑盒的有效期。一般建議一個(gè)試劑盒一次用完，如確需分次使用，需確認(rèn)標(biāo)準(zhǔn)品有多份。標(biāo)準(zhǔn)品稀釋之后需分管保存，理論上是48小時(shí)內(nèi)用完，但實(shí)在是樣本收集需要時(shí)間的話，盡量在一周內(nèi)用完。

抗原和抗體的結(jié)合范圍

在選擇試劑盒的時(shí)候還應(yīng)注意抗原和抗體的結(jié)合范圍是全長(zhǎng)蛋白還是活體剪切體或者磷酸化特異性位點(diǎn)的蛋白。比如Human Caspase-7 ELISA Kit檢測(cè)的是全長(zhǎng)蛋白，Human Cleaved Caspase-7(Asp198) ELISA Kit檢測(cè)的則是活體剪切體，Human Phospho-AKT1(S473) Quantitative ELISA kit檢測(cè)的是S473磷酸化的AKT1蛋白。應(yīng)根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)?zāi)康臏?zhǔn)確選擇相應(yīng)的試劑盒。

檢測(cè)的指標(biāo)數(shù)量

ELISA試劑盒更適合用于單個(gè)指標(biāo)的大量樣本檢測(cè)，如果檢測(cè)指標(biāo)超過(guò) 5 個(gè)，且樣本量較小時(shí)，ELISA 檢測(cè)方法并不是*。建議考慮多因子檢測(cè)方法，例如Raybiotech抗體芯片或者Luminex液相芯片方法，CBA檢測(cè)方法等

兔一氧化氮合成酶(NOS)  ELISA試劑盒   ELISA檢測(cè)系統(tǒng)是免疫學(xué)反應(yīng)應(yīng)用到科研生產(chǎn)中最為廣泛最為靈敏的技術(shù)手段，有著十分重要的作用。操作步驟雖然看起來(lái)比較簡(jiǎn)單但是實(shí)驗(yàn)過(guò)程有很多的操作要點(diǎn)需要掌握，操作步驟中如果稍有不慎，操作不合理的地方，就會(huì)造成很多問(wèn)題從而影響到ELISA試劑盒檢測(cè)的準(zhǔn)確性，大大降低試驗(yàn)質(zhì)量。比如說(shuō)花板，ELISA試劑盒假陽(yáng)性，全顯色，全部顯色，顯色比空白還低……這就需要我們?cè)趯?shí)驗(yàn)過(guò)程中多做總結(jié)，逐步完善，還有就是要多多學(xué)習(xí)，分享學(xué)習(xí)心得。下面就大體總結(jié)一下ELISA實(shí)驗(yàn)的常見(jiàn)問(wèn)題和解決方法，同大家一起分享。

1、包被原的性質(zhì)很重要，蛋白濃度，是否降解，這關(guān)系到你做出的抗體可不可以被其識(shí)別，所以保存抗原很重要。還有有的包被原可能不是蛋白，對(duì)于生物素和脂類(lèi)物質(zhì)或小分子物質(zhì)我們要事先對(duì)其改造再加以包被，我把方法簡(jiǎn)要的列出如下:①親和素生物素:先親和素先包被載體，加入生物素化的DNA，這種包被方法均勻、牢固，已擴(kuò)大應(yīng)用于各種抗原物質(zhì)的定量測(cè)定。ELISA試劑盒②脂類(lèi)物質(zhì):可將其在有機(jī)溶劑（例如乙醇）中溶解后加入ELISA板孔中，開(kāi)蓋置冰箱或冷風(fēng)吹干，待酒精揮發(fā)后，讓脂質(zhì)自然干固在固相表面。③小分子必須依靠和大的蛋白載體偶聯(lián)后才能固定在固相載體上。

2、包被液的選擇，一般選擇ph9.6的碳酸鹽緩沖液。但有時(shí)由于試驗(yàn)的需要，包被原的特殊性也可能采用中性的緩沖溶液來(lái)包。應(yīng)注意以下原理：由于蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過(guò)物理吸附結(jié)合的，靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團(tuán)與固相載體表面的疏水基團(tuán)間的作用，這種物理吸附是非特異性的，受蛋白質(zhì)的分子量、等電點(diǎn)、濃度等的影響，大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)通常含有更多的疏水基團(tuán)，故更易吸附到固相載體表面。具體的試驗(yàn)還要有堅(jiān)固的理論外也要實(shí)踐，看一下最終可不可以應(yīng)用到自己試驗(yàn)當(dāng)中去。人ELISA試劑盒常用的包被液除了剛才提到的pH9.6碳酸鹽緩沖液，還有pH7.2的磷酸鹽緩沖液和pH7-8的Tris-HCL緩沖液等等。

3、封閉：繼包被之后用高濃度的無(wú)關(guān)蛋白質(zhì)溶液再包被的過(guò)程。封閉就是讓大量不相關(guān)的蛋白質(zhì)充填這些空隙，從而排斥ELISA后的步驟中干擾物質(zhì)的再吸附。常用封閉劑有：0.05%-0.5%的BSA;10%的小牛血清或1%明膠;脫脂奶粉，比較價(jià)廉，可以高濃度使用（5%-10%）;還有一些稀有用到的各種動(dòng)物血清（主要為了排除相似蛋白干擾）和酪蛋白等等。但最終選用什么，要依據(jù)試驗(yàn)具體來(lái)實(shí)踐。

4、洗滌板：可以說(shuō)在ELISA操作中，洗滌是最主要的關(guān)鍵技術(shù)。因?yàn)榫郾揭蚁┑人芰蠈?duì)蛋白質(zhì)的吸附是普遍性的，為達(dá)到分離游離的和結(jié)合的酶標(biāo)記物的目的，清除殘留在板孔中游離的物質(zhì)，以及非特異性地吸附的干擾物質(zhì)，在洗滌時(shí)又應(yīng)把這種非特異性吸附的干擾物質(zhì)洗滌下來(lái)。所以在洗板時(shí)會(huì)有一定誤差，人為因素很大（當(dāng)然有條件的用洗板機(jī)除外），洗的不*或串了孔，對(duì)如此靈敏的ELISA系統(tǒng)可是不小的影響。

5、加抗體標(biāo)本（和二抗）:注意該換槍頭時(shí)換槍頭。ELISA試劑盒標(biāo)本稀釋一般可用pbs稀釋?zhuān)部捎梅忾]液去稀釋。如需加二抗，還要注意二抗的工作濃度，太高浪費(fèi)，太低則著色淺。

6、顯色:顯色系統(tǒng)又很多，我們一開(kāi)始做的時(shí)候，要選擇適宜的顯色系統(tǒng)。注意顯色系統(tǒng)酶活性底物的保存HRP結(jié)合物加硫柳泵，AP結(jié)合物可加疊氮鈉。

7、每次做盡量要把陰陽(yáng)空三個(gè)對(duì)照做好，如出現(xiàn)問(wèn)題也好分析。

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