怎么做好微生物污染的預(yù)防？

微生物污染在細(xì)胞培養(yǎng)中是非常常見的，也是令人頭大的一件事情。所以我們一定要將問題扼殺于搖籃之中，規(guī)范實(shí)驗(yàn)中的各個(gè)步驟，確保細(xì)胞“寶寶"在無污染的情況下健康成長(zhǎng)。

1．實(shí)驗(yàn)進(jìn)行前，準(zhǔn)備好所需的試劑和器材。玻璃吸管和玻璃培養(yǎng)瓶的消毒：1)高壓蒸汽滅菌15分鐘以上；2)干烤消毒140℃2小時(shí)以上。

2．培養(yǎng)基(pH7.2)和血清配制好后要做無菌試驗(yàn)：將血清按10%加入培養(yǎng)基內(nèi)，用無菌的玻璃離心管或玻璃瓶取*培養(yǎng)基5-10ml置培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)2-3天，肉眼見無渾濁或沉淀等異物。分裝后置4℃保存。

3．消化液(pH7.8)或其它加入液，應(yīng)用高壓蒸汽滅菌或一次性無菌濾器過濾除菌，分裝成支置-20℃保存。

4．超凈臺(tái)用紫外燈照射30-60min，并開啟超凈臺(tái)風(fēng)機(jī)運(yùn)轉(zhuǎn)5-10min，然后用75%酒精擦拭超凈臺(tái)臺(tái)面，再開始實(shí)驗(yàn)操作。

5．實(shí)驗(yàn)進(jìn)行時(shí)，佩戴好口罩及手套，穿上潔凈實(shí)驗(yàn)服，有長(zhǎng)發(fā)則將長(zhǎng)發(fā)扎起或者佩戴帽子，避免灰塵或唾液進(jìn)入培養(yǎng)物中。

6．進(jìn)入超凈臺(tái)前應(yīng)用75%酒精對(duì)雙手及手腕進(jìn)行全面擦拭，確保除菌*。

7．實(shí)驗(yàn)用品用75%酒精擦拭后才能放入超凈臺(tái)內(nèi)。

8．操作時(shí)小心取用無菌物品，應(yīng)避免污染。勿碰觸吸管尖頭，不小心碰觸后應(yīng)立即更換；手及物品不要在暴露的瓶口上方來往，容器打開后，傾斜45度操作，操作完成后及時(shí)蓋上瓶蓋。

9．每次操作只處理一種細(xì)胞；即使不同細(xì)胞使用相同的培養(yǎng)基也不要共享同一瓶培養(yǎng)基，避免細(xì)胞間的交叉污染。

10．實(shí)驗(yàn)用品用完應(yīng)移出超凈臺(tái)，以利于空氣流通；實(shí)驗(yàn)完成后用75%酒精擦拭超凈臺(tái)臺(tái)面。

11．定期清洗或更換超凈臺(tái)過濾膜、預(yù)濾網(wǎng)。

12．此外CO2培養(yǎng)箱的清潔是較易被忽視的地方，應(yīng)1-2個(gè)月對(duì)培養(yǎng)箱定期進(jìn)行清潔消毒。先用75%酒精擦拭培養(yǎng)箱內(nèi)壁、隔板、水盤2-3次，用雙蒸水清洗，再用酒精棉球擦拭一遍，最后紫外燈照射1h以上或進(jìn)行高溫高壓滅菌處理。水盤內(nèi)加入無菌水（應(yīng)每周更換），待培養(yǎng)箱內(nèi)溫度、濕度、CO2濃度穩(wěn)定后再放入細(xì)胞。

人膀胱癌細(xì)胞 5637

人膀胱癌細(xì)胞 BIU-87

人膀胱癌細(xì)胞 BT-B

人膀胱癌細(xì)胞 ECV-304

人膀胱癌細(xì)胞 EJ-1[EJ1]

人膀胱癌細(xì)胞 HT-1376

人膀胱移行細(xì)胞癌 J82

人膀胱移行細(xì)胞乳頭瘤 RT4

人膀胱鱗癌細(xì)胞 SCaBER

人膀胱上皮永生化細(xì)胞 sv-huc-1

人膀胱移行細(xì)胞癌 SW780

人膀胱移行細(xì)胞癌細(xì)胞 T24

人膀胱移行細(xì)胞癌 UM-UC-3

小鼠膀胱癌細(xì)胞 MB49

人胚腎細(xì)胞 293T

人腎細(xì)胞腺癌細(xì)胞 769-P

人腎透明細(xì)胞腺癌細(xì)胞 786-O[786-0]

人腎癌細(xì)胞 A498

人腎細(xì)胞腺癌細(xì)胞 ACHN

人腎透明細(xì)胞癌皮膚轉(zhuǎn)移細(xì)胞 caki-1

人腎透明細(xì)胞癌 CAKI-2

人胚腎細(xì)胞 HEK-293（293）

人胚腎細(xì)胞 HEK-293A

人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細(xì)胞 HK-2

人腎上皮細(xì)胞 HKb-20

人腎上腺皮質(zhì)細(xì)腺癌細(xì)胞 NCI-H295R

人腎癌細(xì)胞 OS-RC-2

人胚腎細(xì)胞 ProPakA.6

人腎母細(xì)胞瘤細(xì)胞 SK-NEP-1

人腎上腺皮質(zhì)小細(xì)胞癌細(xì)胞 SW-13

人腎上腺皮質(zhì)小細(xì)胞癌細(xì)胞 SW1353

小鼠腎足細(xì)胞 MPC-5

小鼠腎癌細(xì)胞 Renca

小鼠腎小球系膜細(xì)胞 SV40-MES-13

正常大鼠腎細(xì)胞 NRK-49F

大鼠腎細(xì)胞 NRK-52E

大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞 低分化 PC12低分化

大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞低分化+GFP PC12低分化+GFP

大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞 高分化 PC12高分化

大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞 未分化 PC12未分化

倉(cāng)鼠腎成纖維細(xì)胞 BHK-21(C-13)

豬腎細(xì)胞系 PK-13

豬腎細(xì)胞 PK-15

非洲綠猴腎細(xì)胞 SV40轉(zhuǎn)化 COS-7

恒河猴腎細(xì)胞 MA-104

非洲綠猴胚胎腎細(xì)胞 Marc145

非洲綠猴腎細(xì)胞 VERO

非洲綠猴腎細(xì)胞 VERO E6

非洲綠猴SV40轉(zhuǎn)化的腎細(xì)胞 COS-1

狗腎惡性組織細(xì)胞增生癥細(xì)胞 DH-82

貓腎細(xì)胞 F81

牛腎細(xì)胞 MDBK

狗腎轉(zhuǎn)化細(xì)胞 MDCK

小鼠腎小球系膜細(xì)胞永生化

雞腎小管上皮細(xì)胞永生化