產(chǎn)品名稱：通過STR鑒定人結(jié)腸癌細(xì)胞RKO   

細(xì)胞規(guī)格：1-3×10^6細(xì)胞量

庫存狀態(tài)：現(xiàn)貨

培養(yǎng)液：DMEM + 10% FBS

運輸方式：常溫順豐運輸和干冰順豐運輸

貨 期：復(fù)蘇細(xì)胞需要1-2周，凍存細(xì)胞的需要3-5天（特殊情況會有說明）

質(zhì) 控：無支原體、無污染、符合標(biāo)準(zhǔn)

研究范圍：僅供科研使用

通過STR鑒定人結(jié)腸癌細(xì)胞RKO，我司主要經(jīng)營產(chǎn)品是國內(nèi)傳代細(xì)胞和細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)的生物試劑。GIBCO、HyClone、NTC、SIGMA、 BI 、GEMINI、PAN和SBI無外泌體血清等高品質(zhì)血清。常規(guī)液體培養(yǎng)基、胰酶、雙抗、無血清凍存液、日本三菱產(chǎn)品、ELISA 試劑盒等產(chǎn)品。售后完善，我們以飽滿的熱情歡迎新老客戶選購！

在細(xì)胞培養(yǎng)過程中會出現(xiàn)這樣或那樣的問題，這些問題從細(xì)胞生長角度來說，針對細(xì)胞不貼壁、生長緩慢、生長不好，甚至死亡的原因，我們做以下分析并提出相對應(yīng)的解決方法。

一、培養(yǎng)細(xì)胞不貼壁

可能原因：

 胰蛋白酶消化過度 ；

 支原體污染 ；

 培養(yǎng)基pH值過堿（NaHCO3分解）；               

 細(xì)胞老化 ；

 接種細(xì)胞起始濃度太低或太高 。

解決方法：

 縮短胰蛋白酶消化時間或降低胰蛋白酶濃度；

 分離培養(yǎng)物，檢測支原體。清潔支架或培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物；

 使用無菌醋酸溶液調(diào)整pH值或充入無菌CO2 ；

 啟用新的保種細(xì)胞 ；

 調(diào)節(jié)zui佳接種細(xì)胞濃度。

二、懸浮細(xì)胞成簇

可能原因：

 培養(yǎng)液中含鈣、鎂離子 ；

 支原體污染；

 蛋白酶過度消化使得細(xì)胞裂解；

 DNA污染 。

解決方法：

 用無鈣鎂平衡鹽溶液洗滌細(xì)胞，輕巧吹吸細(xì)胞獲得單細(xì)胞懸液；

 分離培養(yǎng)物，檢測支原體；

 用DNaseI處理細(xì)胞。

三、培養(yǎng)細(xì)胞生長緩慢

可能原因：

 由于更換不同培養(yǎng)液或血清；

 培養(yǎng)液中一些細(xì)胞生長必需成分如谷氨酰胺或生長因子耗盡或缺乏或已被破壞；

 培養(yǎng)物中有少量細(xì)菌或真菌污染；

 試劑保存不當(dāng)；

 接種細(xì)胞起始濃度太低；

 細(xì)胞已老化；

 支原體污染 。

解決方法：

 比較新培養(yǎng)液與原培養(yǎng)液成分，比較新血清與舊血清支持細(xì)胞生長實驗，讓細(xì)胞逐漸適應(yīng)新培養(yǎng)液；

 換入新鮮配置培養(yǎng)液，或補(bǔ)加谷氨酰胺及生長因子；

 用無抗生素培養(yǎng)液培養(yǎng)，如發(fā)現(xiàn)污染，丟棄培養(yǎng)物；

 血清需保存在-10到-20℃。培養(yǎng)液需在2-8℃避光保存。含血清*培養(yǎng)液在2-8℃保存，需在1周內(nèi)用完；

 增加接種細(xì)胞起始濃度；

 換用新的保種細(xì)胞；

 分離培養(yǎng)物，檢測支原體。清潔支架和培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物。

四、培養(yǎng)細(xì)胞生長不好

可能原因：

 細(xì)胞本身的狀態(tài)

細(xì)胞傳代次數(shù)多，細(xì)胞老化；

細(xì)胞的接種量：接種量過低，細(xì)胞生長緩慢；

細(xì)胞傳代時間過晚：細(xì)胞中毒，影響傳代后的細(xì)胞生長；

胰酶消化時間過長或過短：時間過長，細(xì)胞死亡；時間過短，細(xì)胞未*分離而成團(tuán)，細(xì)胞死亡；

細(xì)胞的凍存與復(fù)蘇：慢凍速融。

 污染

支原體污染；

霉菌污染。

 培養(yǎng)基或血清

更換血清或培養(yǎng)基之前未進(jìn)行驗證；

選擇的培養(yǎng)基是否合適；

培養(yǎng)基配制是否準(zhǔn)確無誤。

 培養(yǎng)環(huán)境

CO2供應(yīng)是否正常；

培養(yǎng)箱或搖床溫度控制是否正確。

解決方法：

根據(jù)以上四個方面的可能原因，做出針對性的解決方案

 注意細(xì)胞的本身狀態(tài)：如傳代次數(shù)、接種量等；

 避免產(chǎn)生污染（用正規(guī)、合法、可溯源的血清）；

 要用合適的血清或培養(yǎng)基，zui好經(jīng)過驗證；

 注意實驗室的環(huán)境。

五、培養(yǎng)細(xì)胞死亡

可能原因：

 培養(yǎng)箱內(nèi)無CO2；

 培養(yǎng)箱內(nèi)溫度波動太大；

 細(xì)胞凍存或復(fù)蘇過程中損傷；

 培養(yǎng)液滲透壓不正確；

 培養(yǎng)液中有毒代謝產(chǎn)物堆積 。

解決方法：

 檢測培養(yǎng)箱內(nèi)CO2；

 檢查培養(yǎng)箱內(nèi)溫度；

 取新的保存細(xì)胞種；

 檢測培養(yǎng)液滲透壓；

 換入新鮮培養(yǎng)液。

細(xì)胞培養(yǎng)，尤其是細(xì)胞系的培養(yǎng)，就細(xì)胞消化而言，多做、善于總結(jié)，就可以把細(xì)胞養(yǎng)的越來越好。

絕大部分細(xì)胞消化只要用胰酶潤洗一遍即可：

吸去胰酶后，殘留的那些無法計算體積的附著在細(xì)胞表面的微量胰酶在37度一般不到2min足夠消化細(xì)胞（絕大部分1min不到）。對于這些細(xì)胞原則上不要用胰酶孵育細(xì)胞，連續(xù)這樣傳代，對細(xì)胞傷害很大。簡單的程序是PBS潤洗吸去，胰酶潤洗吸去，然后37度消化。

怎樣算是消化好了呢？

不需要把細(xì)胞全部消化成間隔分布很離散的單個圓形才算消化好了，一般你肉眼觀察貼壁細(xì)胞層，只要能移動了，多半呈沙壯移動，其實已經(jīng)可以了。

一般能移動了，說明細(xì)胞與培養(yǎng)基質(zhì)材料的附著已經(jīng)消失了，細(xì)胞之間的附著也已經(jīng)消失了，細(xì)胞已經(jīng)獨立分布了（雖然沒有呈現(xiàn)很廣的離散分布）。這個時候應(yīng)該停止消化，不要等到看到鏡下所有細(xì)胞都分離得非常好，間隙很大，才停止。

細(xì)胞就是*成單個細(xì)胞懸液，之后在貼壁的過程中仍然會聚集，這個是貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞，尤其是腫瘤細(xì)胞的一個特性，你可以嘗試，準(zhǔn)備100%的單個細(xì)胞懸液，貼壁后觀察細(xì)胞，仍然是幾個幾個細(xì)胞聚集在一起。

一些懸浮培養(yǎng)細(xì)胞也是如此，容易聚集，不要過幾個小時就拿出來吹打成單細(xì)胞懸液。細(xì)胞只要能從基質(zhì)上脫離下來，即使是成片的（比如Calu-3細(xì)胞），吹打不超過20次（一般10次即可），成小規(guī)模聚集（10個細(xì)胞左右）是正常的，不要再去延長消化時間，等待單細(xì)胞懸液出現(xiàn)。

比較難消化的細(xì)胞：

潤洗方法5min還不能消化，以結(jié)腸癌細(xì)胞為例，比如HCT15、LS411和KM12細(xì)胞，胰酶消化，一般10 cm 培養(yǎng)皿，一次多加入300ul-500ul就足夠了。即使這樣難消化的細(xì)胞，一般不超過5min，即可見細(xì)胞成片移動，就應(yīng)該停止消化。一些正常細(xì)胞也會有難消化的時候，比如tsDC細(xì)胞，用胰酶孵育，3min左右即可看到成片沙狀移動。

常規(guī)的細(xì)胞實驗，受消化影響不是很大：

如果不用胰酶去孵育而使用潤洗的方法消化的話（難消化細(xì)胞例外）。但少數(shù)實驗，比如病毒包裝，對細(xì)胞代數(shù)，對細(xì)胞狀態(tài)要求*。這個時候，胰酶消化，就是潤洗，都會對細(xì)胞包裝病毒的能力有影響，傳代次數(shù)一多，細(xì)胞包裝能力就會逐漸下降。這個時候都不用胰酶消化，用一些鹽溶液（不是EDTA液）即可。這些鹽溶液通過影響細(xì)胞外基質(zhì)相關(guān)酶的活性，來使得細(xì)胞脫離基質(zhì)附著表面，但不切割任何蛋白。

EDTA的作用：

許多人不用胰酶，只用EDTA，或者用胰酶/EDTA聯(lián)合作用。這里要明白，胰酶切割細(xì)胞外基質(zhì)的一些負(fù)責(zé)粘連和附著的蛋白，而EDTA通過螯合Ca離子，作用于整聯(lián)蛋白的活性，所以EDTA的作用更加溫和。有的人在胰酶里添加一些EDTA，或者對付特別難消化的細(xì)胞，添加多一些EDTA，就是這個道理。一般不要試圖延長消化時間（如果10min還消化不*的話），而應(yīng)該想其它辦法。

PBS洗滌：

消化之前用PBS洗滌，是常見的操作，因為血清中含有抑制胰酶的蛋白。對于一些難消化細(xì)胞，可以配制不含Ca，Mg離子的PBS，因為這些離子也會抑制胰酶的活性。但對于絕大部分細(xì)胞用胰酶或者EDTA溶液潤洗即可消化，不需要配制不含Ca，Mg離子的溶液。

每段時間定期對細(xì)胞房、培養(yǎng)箱&水盤、水浴鍋、廢液桶等容易染菌的個角落細(xì)菌、真菌等微生物的清除，每次操作完都整理好細(xì)胞房，帶好手套、口罩、鞋套，防止人為因素污染。

MCF7/Taxol人乳腺癌紫杉醇耐藥株

HCT8/5-fu 人回腸直腸腺癌細(xì)胞五氟尿嘧啶耐藥株

LOVO/5-FU 人結(jié)腸癌細(xì)胞五氟尿嘧啶耐藥株

HCT116/L人結(jié)腸癌奧沙利鉑耐藥細(xì)胞

HL60/ADR人早幼粒急性白血病細(xì)胞耐阿霉素株

PC9GR(PC9R)人肺癌細(xì)胞耐吉非替尼

LOVO/ADR人結(jié)腸癌細(xì)胞阿霉素耐藥株

HNE1/DDP人鼻咽癌細(xì)胞順鉑耐藥株

SGC7901/5-fu人胃癌細(xì)胞五氟尿嘧啶耐藥株

A549/DDP人肺癌細(xì)胞順鉑耐藥株

MCF-7/DDP人乳腺癌細(xì)胞順鉑耐藥株

A549/ADR人肺癌細(xì)胞阿霉素耐藥株

SGC7901/DDP人胃癌細(xì)胞順鉑耐藥株

SKOV3/DDP人卵巢癌細(xì)胞順鉑耐藥株

HELA/DDP人宮頸癌耐順鉑細(xì)胞株

3T3-L1 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞

NIH/3T3小鼠胚胎細(xì)胞

Raw264.7小鼠單核巨噬白血病細(xì)胞

B16-F10小鼠黑色素瘤高轉(zhuǎn)細(xì)胞

B16 小鼠黑色素瘤細(xì)胞

CT26.WT小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞

SV40 MES 13小鼠腎小球系膜細(xì)胞

F9 小鼠畸胎瘤細(xì)胞

MLE-12 小鼠肺泡上皮細(xì)胞

Sp2/0-Ag14 小鼠骨髓瘤細(xì)胞

BV2 小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞  

DC2.4小鼠樹突狀細(xì)胞

U14 小鼠子宮頸癌細(xì)胞

M-NFS-60小鼠骨髓性白血病細(xì)胞

mMSC小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞

HL-1小鼠心肌細(xì)胞

TM3 小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞

k7m2.wt小鼠骨肉瘤成骨細(xì)胞

mc3t3 e1小鼠胚胎成骨細(xì)胞前體細(xì)胞

hepa1-6 小鼠肝癌細(xì)胞

SP2/0小鼠骨髓瘤細(xì)胞

HT22小鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞系

MC38小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞

mpc5小鼠足細(xì)胞

4T1 小鼠乳腺癌細(xì)胞

ANA-1小鼠巨噬細(xì)胞

TM4 小鼠睪丸支持細(xì)胞

STO 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞

bend.3 小鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞

J774A.1小鼠單核巨噬細(xì)胞

H9C2 大鼠心肌細(xì)胞

PC-12(低分化) 大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞(低分化)

PC-12(高分化) 大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞(高分化)

AR42J 大鼠胰腺外分泌細(xì)胞

IEC-6 大鼠小腸引窩上皮細(xì)胞

RT4-D6P2T 大鼠神經(jīng)鞘瘤細(xì)胞

INS-1 大鼠胰島細(xì)胞瘤細(xì)胞

NRK-52E 大鼠腎小管導(dǎo)管上皮細(xì)胞

BHK-21 倉鼠腎成纖維細(xì)胞

PK-15 豬腎細(xì)胞

Duckembyro 鴨胚胎成纖維細(xì)胞

vero 綠猴腎細(xì)胞

Hep3B人肝癌細(xì)胞

HPAC人胰腺癌細(xì)胞

HT-1376 人膀胱癌細(xì)胞

JAR 人胎盤絨毛癌細(xì)胞

KNS-89 人腦膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞

雙抗 15140-122、SV30010

胰酶 25200-056、SH30042.01

GIBCO 胰酶 25200-072

DMEM高糖培養(yǎng)基 C11995500BT

DMEM低糖培養(yǎng)基 C11885500BT

PBS C10010500BT

1640培養(yǎng)基 C11875500BT

DMEM/F12 C11330500BT

MEM培養(yǎng)基 C11095500BT

α-MEM C12571500BT

DMEM低糖 SH30021.01

DMEM高糖 SH30022.01、SH30243.01

DMEM/F-12 1:1 SH30023.01

MEM/EBSS SH30024.01

PBS緩沖液 SH30256.01

α-MEM SH30265.01

RPMI-1640 SH30809.01

DPBS SH30028.02