TOV-112D 人上皮性卵巢癌細(xì)胞培養(yǎng)手冊(cè)

蘇州千舍生物實(shí)驗(yàn)室所出售細(xì)胞，均含有STR鑒定報(bào)告，保證細(xì)胞最佳狀態(tài)發(fā)貨~~

規(guī)格： 1*10 6  

該細(xì)胞系于 1992 年 10 月從一名42歲女性患有早發(fā)性卵巢癌的患者中啟動(dòng)。該患者為法裔加拿大血統(tǒng)，卵巢癌家族史不明。與 TOV-21G ( ATCC CRL-11730 ) 和 OV-90 ( ATCC CRL-11732 ) 不同，TOV-112D 細(xì)胞系在染色體 3p24 處沒(méi)有缺失。

細(xì)胞特性

1） 來(lái)源：42歲 女性 卵巢癌組織

2） 形態(tài)：上皮樣   貼壁生長(zhǎng)

3） 含量：>1x10^6  細(xì)胞數(shù)

4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5）用途：僅供科研使用。

運(yùn)輸和保存

干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞

（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。

（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。

細(xì)胞接收后的處理

1）收到細(xì)胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。

2）請(qǐng)?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。

3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過(guò)程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)70%-80%以上，可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過(guò)程中，若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收。

4）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。  收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 。                      

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備基礎(chǔ)培養(yǎng)基是 1:1 的 MCDB 105 培養(yǎng)基（含最終濃度為 1.5 g/L 碳酸氫鈉）和M199 培養(yǎng)基（含最終濃度為 2.2 g/L 碳酸氫鈉）的混合物，優(yōu)質(zhì)胎牛血清，15%；雙抗，1%。

備注：該細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢，培養(yǎng)周期在3-4周左右。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配

二． 細(xì)胞處理：

1） 凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mLwan全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8mlwan培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過(guò)夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來(lái)終止消化。

3. 輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說(shuō)明書(shū)要求配置的新的wan全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

3）細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。

下面T25瓶為例；

1. 細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過(guò)程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，來(lái)決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10^6~1×107個(gè)活細(xì)胞/ml.

2. 1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ，按每1ml凍存液含1×10^6~1×107個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

3. 將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過(guò)夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

細(xì)胞培養(yǎng)的原則

無(wú)菌原則

1.操作臺(tái)環(huán)境無(wú)菌：紫外線消毒至少30分鐘，75%酒精擦拭。

2.實(shí)驗(yàn)材料無(wú)菌：紫外線照射、酒精擦拭、酒精燈、封口膜。

3.實(shí)驗(yàn)時(shí)手部無(wú)菌。

4.實(shí)驗(yàn)操作無(wú)菌。

減少細(xì)胞環(huán)境擾動(dòng)原則

1.培養(yǎng)箱內(nèi)溫度恒定，進(jìn)行操作前培養(yǎng)基預(yù)熱。

2.轉(zhuǎn)移細(xì)胞時(shí)需輕拿輕放、避免震動(dòng)。

3.縮短細(xì)胞在培養(yǎng)箱外的時(shí)間，維持恒定的CO2濃度。

4. 槍頭吹打時(shí)要輕柔，避免細(xì)胞發(fā)生破壞。

小鼠腦神經(jīng)瘤細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 neuro-2a+luc

小鼠胰腺癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 panc02+LUC

小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞+GFP RAW 264.7+GFP

小鼠前列腺癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 RM-1+LUC

大鼠腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞綠色熒光標(biāo)記 C6+LUC

大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞低分化+GFP PC12低分化+GFP

中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞k1 亞克隆系 CHO-K1（懸浮）

鴨胚胎成纖維細(xì)胞 Duck embryo

人膽囊上皮細(xì)胞永生化

人胰腺癌相關(guān)成纖維細(xì)胞永生化

人胰腺癌細(xì)胞永生化

人膽囊上皮細(xì)胞永生化+GFP GFP

C57小鼠巨噬細(xì)胞永生化

豬扁桃體上皮細(xì)胞永生化

人風(fēng)濕性關(guān)節(jié)滑膜成纖維細(xì)胞永生化

豬脂肪干細(xì)胞永生化

鴨胚肝間質(zhì)細(xì)胞永生化

羊睪丸間質(zhì)細(xì)胞永生化

兔肝間質(zhì)細(xì)胞永生化

人頸靜脈球瘤細(xì)胞永生化

人主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞永生化

山羊乳腺上皮細(xì)胞永生化

豬骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞永生化

人肝竇內(nèi)皮細(xì)胞永生化

人副神經(jīng)節(jié)瘤細(xì)胞永生化

人腸息肉上皮細(xì)胞永生化

人原代聽(tīng)神經(jīng)瘤細(xì)胞永生化

人原代髓核細(xì)胞永生化

人原代神經(jīng)鞘膜瘤細(xì)胞永生化

人胰腺腫瘤成纖維細(xì)胞永生化

人子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞永生化

大鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞永生化

小鼠肺成纖維細(xì)胞永生化

小鼠胰腺星狀細(xì)胞永生化

鴨腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞永生化

湖羊瘤胃上皮細(xì)胞永生化

豬肝星狀細(xì)胞永生化

兔肝臟間質(zhì)細(xì)胞永生化

豬鼻腔粘膜上皮細(xì)胞永生化

小鼠腎小球系膜細(xì)胞永生化

小鼠脂肪干細(xì)胞永生化

豬子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞永生化

人前庭鞘膜瘤細(xì)胞永生化

人胰腺神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤細(xì)胞永生化

小鼠附睪脂肪干細(xì)胞永生化

小鼠骨髓巨噬細(xì)胞永生化

雞胚成纖維細(xì)胞永生化

豬主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞永生化

豬小腸上皮細(xì)胞永生化

雪貂鼻腔粘膜上皮細(xì)胞永生化

人淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞永生化

人主動(dòng)脈瓣膜間質(zhì)細(xì)胞永生化

人睪丸支持細(xì)胞永生化

人骨骼肌細(xì)胞永生化

人卵巢癌相關(guān)成纖維細(xì)胞永生化

人甲狀旁腺細(xì)胞永生化

人乳腺上皮細(xì)胞永生化

人乳腺癌成纖維細(xì)胞永生化

人軟骨細(xì)胞永生化

小鼠角膜上皮細(xì)胞永生化

小鼠肝星狀細(xì)胞永生化

大鼠內(nèi)皮祖細(xì)胞永生化

雞氣管黏膜上皮細(xì)胞永生化

大鼠毛囊干細(xì)胞永生化細(xì)胞

人成骨細(xì)胞永生化

人雪旺細(xì)胞永生化

人脂肪干細(xì)胞永生化

大鼠海綿體內(nèi)皮細(xì)胞永生化

雞骨骼肌細(xì)胞永生化

小鼠結(jié)腸黏膜上皮細(xì)胞永生化

豬皮膚成纖維細(xì)胞永生化

小鼠肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞永生化

小鼠卵巢顆粒細(xì)胞永生化

小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞永生化

小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞永生化+GFP GFP

小鼠內(nèi)皮祖細(xì)胞永生化

小鼠角膜基質(zhì)細(xì)胞永生化

小鼠腸間質(zhì)細(xì)胞永生化

人支氣管平滑肌細(xì)胞永生化

貓主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞永生化

雞腎小管上皮細(xì)胞永生化

大鼠乳腺成纖維細(xì)胞永生化