何為細(xì)胞老化？

1882年，德國(guó)生物學(xué)家Weismann曾大膽預(yù)測(cè)“在細(xì)胞水平存在老化現(xiàn)象"。他推測(cè)：機(jī)體的壽命限制受控于體細(xì)胞的分裂能力；在遺傳進(jìn)化中，不同物種的體細(xì)胞獲得了不同分裂的潛能，從而決定了不同物種的壽命長(zhǎng)短。

20世紀(jì)50年代，Swin和他的同事利用原代細(xì)胞體外培養(yǎng)試驗(yàn)證明了來(lái)源于不同物種的纖維細(xì)胞均不具備無(wú)限分裂的潛能。取得突破性進(jìn)展的還是Hayflflick和Moorhead，他們做了更系統(tǒng)更細(xì)致的觀察和描述，他們對(duì)25株人成纖維細(xì)胞進(jìn)行原代培養(yǎng)，在這個(gè)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，經(jīng)過(guò)約50次傳代之后，所有細(xì)胞出現(xiàn)功能退化，并且喪失分裂能力的現(xiàn)象。此后人們將這一現(xiàn)象稱之為“Hayflflick極限"或者自發(fā)性老化。之后也有事實(shí)證明，細(xì)胞老化并不是體外培養(yǎng)所導(dǎo)致，細(xì)胞在體內(nèi)也會(huì)隨著年齡的增長(zhǎng)，逐步走向老化。

※細(xì)胞老化最開始的現(xiàn)象通常為細(xì)胞內(nèi)部會(huì)出現(xiàn)空泡（可能是凋亡小體），也可能會(huì)出現(xiàn)黑點(diǎn)，大多沿細(xì)胞周邊排布，內(nèi)部中間也可能會(huì)顯現(xiàn)一些，但相對(duì)周邊較少；

※老化的細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞體積縮小，胞質(zhì)濃縮，胞膜起泡，皺縮等現(xiàn)象；

※老化以后的細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)立體感慢慢消失，開始成扁平狀，細(xì)胞與細(xì)胞之間的間隔減小或混在一起，細(xì)胞不再是梭形，而會(huì)成為各種不規(guī)則形狀；

※細(xì)胞折光性變差，鏡下可見細(xì)胞“變薄"，做轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)時(shí)，細(xì)胞死亡率會(huì)較高，但培養(yǎng)液不會(huì)發(fā)生迅速變黃的現(xiàn)象，仍清亮。（如果是細(xì)菌污染的話，一般會(huì)出現(xiàn)培養(yǎng)液的迅速變黃，混濁，鏡下可見大量繁殖的細(xì)菌；若是支原體污染的話，細(xì)胞也會(huì)失去正常形態(tài)，會(huì)有細(xì)胞的死亡）；

※細(xì)胞的貼壁性減弱，開始有細(xì)胞漂浮在培養(yǎng)液中；

※老化的細(xì)胞表面分泌物會(huì)增多，細(xì)胞表面的純凈度越來(lái)越低；

※分裂的細(xì)胞數(shù)量明顯的減少，同時(shí)細(xì)胞的增殖速度也會(huì)大大下降；

細(xì)胞開始長(zhǎng)角分化。

如何進(jìn)行污染源排查？

*血清：其他試劑保持不變，僅更換血清。

*基礎(chǔ)培養(yǎng)基：其他試劑保持不變，僅更換基礎(chǔ)培養(yǎng)基。

*PBS：其他試劑保持不變，僅更換PBS。

*胰酶：若細(xì)胞復(fù)蘇的很好，一傳代就污染，可以嘗試其他試劑保持不變，更換消化用胰酶，看細(xì)胞狀態(tài)。

細(xì)胞反復(fù)復(fù)蘇都會(huì)出現(xiàn)污染，那可保持培養(yǎng)體系不變，培養(yǎng)其他類型且適用于此培養(yǎng)體系的細(xì)胞，觀察是否有污染出現(xiàn)。整個(gè)營(yíng)養(yǎng)體系：基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清、營(yíng)養(yǎng)添加物都可使用控制變量法進(jìn)行排查。